Neste segundo episódio da saga Uma Noite no Museu, Larry enfrenta uma batalha tão épica que só poderia se desenrolar nos corredores do maior museu do mundo. Agora, Larry precisa tentar salvar seus amigos, antes inanimados, do que poderia ser sua última batalha entre as maravilhas do Smithsonian; e todas elas, das famosas pinturas nas paredes às espaçonaves, de repente ganham vontade própria.